[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯
學(xué)習(xí)家兔呼吸運(yùn)動的記錄方法，觀察各種因素對呼吸運(yùn)動的影響并分析 其作用途徑。
[實(shí)驗(yàn)原理]
呼吸運(yùn)動是呼吸**節(jié)律性活動的反映。在不同生理狀態(tài)下，呼吸運(yùn)動所發(fā)生的適應(yīng)性變化有賴于神經(jīng)系統(tǒng)的反射性調(diào)節(jié)，其中較為重要的有呼吸**、肺牽張反射、本體感受性反射以及化學(xué)感受器的反射性調(diào)節(jié)。因此，體內(nèi)外各種刺激可以直接作用于**部位或通過不同的感受器反射性地影響呼吸運(yùn)動。
[實(shí)驗(yàn)器材與藥品]
哺乳動物手術(shù)器械1套，兔手術(shù)臺，氣管插管，注射器(20ml、5ml各1只)，50cm長的橡皮管1條，張力換能器，生物信號采集分析系統(tǒng)。（生產(chǎn)廠家;北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司）
1%****，3%乳酸，CO2 ，N2 ，生理鹽水等。
[實(shí)驗(yàn)對象]
家兔
[實(shí)驗(yàn)步驟和方法]
1.手術(shù)步驟
(1)麻醉與固定 由耳緣靜脈注射1%****(30mg/kg)，待兔麻醉后，仰臥位固定于兔臺上。
(2)頸部手術(shù) 備皮后沿頸部正中切開皮膚約6~8cm并分離皮下組織，用止血鉗鈍性分離氣管前面的肌肉，暴露氣管。在氣管兩側(cè)辨認(rèn)并分離兩側(cè)迷走神經(jīng)，在神經(jīng)下穿線備用(勿結(jié)扎)。將甲狀軟骨以下的氣管與周圍組織分離，在氣管下穿入絲線，于氣管上段作一倒“T”形切口，插入“Y”形氣管插管，用絲線結(jié)扎并固定氣管插管，手術(shù)完畢后用生理鹽水紗布覆蓋手術(shù)切口部位。
(3)膈肌小片的制備 備皮后切開胸骨下端劍突部位的皮膚，沿腹白線向下切開2cm左右，打開腹腔，暴露出劍突軟骨和劍突骨柄，辨認(rèn)劍突內(nèi)側(cè)面附著的兩塊膈小肌，仔細(xì)分離劍突上附著的腹膜至膈小肌附著處，剪斷劍突骨柄(注意壓迫止血)，使劍突完全游離，即制備好膈肌小片。此時可觀察到劍突軟骨完全跟隨膈肌收縮而上下自由移動。
2.呼吸運(yùn)動的描記方法
用彎針鉤住劍突軟骨(針尖向上)，使游離的膈肌小片和張力換能器相連接，信號經(jīng)第4通道輸入MD-2000生物信號采集分析系統(tǒng)，由計算機(jī)描記呼吸運(yùn)動曲線。此種描記方法可反映呼吸頻率、呼吸深度以及呼吸的停止?fàn)顟B(tài)，缺點(diǎn)是在動物移動或稍有掙扎后，基線變化較大，不得不再次調(diào)整描記系統(tǒng)。
3.儀器 操作
(1)啟動計算機(jī)，桌面上雙擊“DB088型”圖標(biāo)，進(jìn)入db088型生物信號采集分析系統(tǒng)。
(2)點(diǎn)擊菜單欄“實(shí)驗(yàn)”，在下拉菜單中依次選“生理學(xué) 實(shí)驗(yàn)”、“實(shí)驗(yàn)17呼吸運(yùn)動調(diào)節(jié)”，點(diǎn)擊“確定”，即進(jìn)入呼吸調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)界面。保留通道4，其余通道可關(guān)閉。界面左上角可見張力換能器界面，靈敏度調(diào)節(jié)為l-2，定標(biāo)、調(diào)零已事先設(shè)定。
(3)采樣 將鼠標(biāo)移至左下角點(diǎn)擊“記錄”，計算機(jī)即開始連續(xù)采樣，屏幕上出現(xiàn)呼吸運(yùn)動曲線，點(diǎn)擊“ESC” 或按空格鍵可停止采樣。采樣速度的調(diào)節(jié)是利用鼠標(biāo)點(diǎn)擊左下角的“快”或 “慢”按鈕，使采樣間隔調(diào)至64~256ms。屏幕有時無信號時，可點(diǎn)擊屏幕右方的“基線”按鈕，記錄曲線會自動出現(xiàn)在屏幕上;或是將鼠標(biāo)移至標(biāo)尺處按住左鍵上下拖動，即可使曲線出現(xiàn)在屏幕上。實(shí)驗(yàn)中可選擇“放大”或“縮小”按鈕放大或縮小曲線的幅度，選擇“壓縮”按鈕，調(diào)至“1:1”或“1:2”，點(diǎn)擊“平滑”按鈕可對曲線進(jìn)行平滑，點(diǎn)擊“50Hz”按鈕可去除交流電干擾。
(4)標(biāo)記 實(shí)驗(yàn)中或?qū)嶒?yàn)后可在“標(biāo)記項(xiàng)目”下拉菜單中選取應(yīng)標(biāo)記的項(xiàng)目，點(diǎn)擊“標(biāo)記”圖標(biāo)，然后將鼠標(biāo)移到需要標(biāo)記部位，點(diǎn)擊左鍵，就完成了標(biāo)記。
(5)實(shí)驗(yàn)過程中如果需要查看前面的結(jié)果，可在停止采樣的條件下，點(diǎn)擊“重放”按鈕、點(diǎn)擊左向按紐或以鼠標(biāo)拖動水平滾動條。
(6)測量 實(shí)驗(yàn)后用鼠標(biāo)選中需要測量的一段曲線，點(diǎn)擊“測量”圖標(biāo)，即可顯示測量結(jié)果。
(7)圖形編輯 用鼠標(biāo)選中需剪切曲線，點(diǎn)擊“剪切”圖標(biāo)，即可重組記錄曲線，如對結(jié)果不滿意，可恢復(fù)重新編輯。
(8)打印 同Word的打印操作相同。
(9)保存與退出
4.觀察項(xiàng)目
(1)觀察家兔正常呼吸運(yùn)動曲線，分清吸氣相與呼氣相。
(2)CO2對呼吸運(yùn)動的影響 將氣管插管開口端與裝CO2的球膽管相對，打開球膽管上的彈簧夾，使一部分CO2隨著吸氣進(jìn)入氣管(如用一小燒杯罩住氣管插管開口端，因局部CO2濃度升高，效果會更明顯)，觀察吸入高濃度CO2后呼吸運(yùn)動有何變化? 呼吸發(fā)生明顯變化后，去除CO2的吸入。
(3)缺氧對呼吸運(yùn)動的影響 將氣管插管開口端與裝N2的球膽管相對，打開球膽管上的彈簧夾，使一部分N2隨著吸氣進(jìn)入氣管(亦可用一小燒杯罩住氣管插管開口端)，觀察吸入高濃度N2后呼吸運(yùn)動有何變化? 呼吸發(fā)生明顯變化后，去除N2的吸入。
(4)H+對呼吸運(yùn)動的影響 取5ml注射器，由耳緣靜脈較快地注入3%乳酸2ml，觀察呼吸運(yùn)動的變化過程。
(5) 增加無效腔對呼吸運(yùn)動的影響 把50cm長的橡皮管連接在氣管套管的開口端，動物通過此橡皮管進(jìn)行呼吸，此時呼吸運(yùn)動將有何變化?呼吸發(fā)生明顯變化后，應(yīng)即去掉橡皮管。
(6) 切斷迷走神經(jīng)對呼吸運(yùn)動的影響 分別切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)干，比較迷走神經(jīng)切斷前后呼吸運(yùn)動的變化。
[注意事項(xiàng)]
1.氣管插管后，側(cè)管要保持通暢。
2.制備膈肌小片時要小心操作，避免家兔出現(xiàn)氣胸。
3.膈肌小片與換能器間連線的松緊度要適當(dāng)。
4.每觀察一個項(xiàng)目，要待家兔呼吸恢復(fù)正常后，才能進(jìn)行下一步操作。